高效液相色譜法測(cè)定止喘口服液中鹽酸黃麻堿的含量

　　1 材料

　　SHIMDZU高效液相色譜儀，SPD10A紫外檢測(cè)器，Classvp色譜工作站（日本島津），鹽酸麻黃堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)171242200405），止喘口服液［批準(zhǔn)文號(hào)：贛藥制字（2004）第H0304號(hào)，江西省兒童醫(yī)院制劑室自制］；乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈0.1%磷酸溶液（10∶90，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)：207 nm；流速0.7 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量20 μL。在此條件下鹽酸麻黃堿與其它組分能達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

　　2.2 溶液的制備

　　對(duì)照品溶液 精密稱取105 ℃干燥至恒重的鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成15 mg/L的溶液，作為儲(chǔ)備液，備用。

　　供試品溶液 精密量取止喘口服液2 mL，置于25 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾。精密量取續(xù)濾液2 mL，置于10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

　　陰性對(duì)照液 按處方比例及工藝，制備缺鹽酸麻黃堿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備不含鹽酸麻黃堿的陰性樣品溶液。

　　2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性及專屬性考察

　　分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照品溶液各20 μL注入高效液相色譜儀，陰性對(duì)照品在鹽酸麻黃堿峰位置處無(wú)吸收峰，即其它成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，鹽酸麻黃堿峰與其它組分峰基線分離良好，對(duì)照品溶液及供試品溶液主峰的保留時(shí)間一致，保留時(shí)間約13 min。

　　2.4 線性關(guān)系考察

　　精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用流動(dòng)相稀釋至4.5、9.0、13.5、18.0、22.5、27.0 mg/L 6個(gè)不同濃度，在上述色譜條件下，精密量取以上溶液各20 μL，注入液相色譜儀，以峰面積Y對(duì)濃度X進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=58 647.6X 20 917.1，r=0.999 8，n=6，在4.5～27.0 mg/L濃度范圍內(nèi)峰面積對(duì)濃度的線性關(guān)系良好。

2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

　　精密量取15 mg/L的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.18 mL，于100 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，得濃度為0.027 mg/mL鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，取上述溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算精密度，測(cè)得鹽酸麻黃堿峰面積值為1 609 964、1 591 984、1 610 760、1 616 328、1 620 406，RSD為0.68%，表明精密度良好。

　　2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

　　取同一批口服液5份，按“2.2.2”項(xiàng)下供試品處理方法處理樣品，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)得樣品鹽酸麻黃堿含量分別為12.14、12.54、12.51、12.60、12.78 mg/L，RSD為0.12%，表明重復(fù)性良好。

　　2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)行測(cè)定，其含量RSD為0.15%，表明12 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果基本穩(wěn)定。

　　2.8 加樣回收試驗(yàn)

　　精密移取已知含量的樣品9份，分別加入高、中、低3個(gè)濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品各3份，在上述色譜條件下，每次進(jìn)樣20 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

　　2.9 樣品測(cè)定

　　取4批次樣品，按供試品溶液的制備方法制備，另精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，配成一定的濃度（13.44 mg/L），分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，按上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。

　　3 討論

　　用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸麻黃堿的含量，不同的文獻(xiàn)報(bào)道，檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相有所不同。本文將適量濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品溶液在200～400 nm加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表2 樣品測(cè)定結(jié)果

　　圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示鹽酸麻黃堿在207 nm處有最大吸收，且其它組分在該波長(zhǎng)處無(wú)干擾，因此，選擇該波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。曾以乙腈磷酸二氫鉀緩沖液、甲醇水、甲醇0.01 mol/L磷酸氫二鉀為流動(dòng)相，鹽酸麻黃堿有拖尾峰出現(xiàn)，分離效果差，而以乙腈0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，鹽酸麻黃堿在4.5～27.0 mg/L范圍內(nèi)，溶液的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，檢測(cè)靈敏度高，保留時(shí)間適宜。

　　本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定止喘口服液中鹽酸麻黃堿的含量，確定了色譜條件及檢測(cè)濃度范圍，本方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，解決了紫外分光光度法測(cè)定時(shí)樣品處理繁瑣費(fèi)時(shí)造成的誤差。采用紫外分光光度法測(cè)定，在樣品處理時(shí)需精密加入茚三酮溶液（臨用新配），用1%碳酸鈉溶液調(diào)pH至7.8～7.9，然后置水浴中加熱10 min，迅即放冷，精密加水7 mL再測(cè)定。而采用HPLC法樣品只需過(guò)濾稀釋后直接進(jìn)樣，節(jié)省了時(shí)間，也節(jié)約了試劑，適用于鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定。