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興奮劑檢測(cè)

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作者: 時(shí)間:2007-08-09 來(lái)源: 收藏

  
在體育比賽中,有些運(yùn)動(dòng)員為了爭(zhēng)取取得好名次、提高成績(jī),常服用一些藥物,企圖憑借藥物作用獲得榮譽(yù)。這種做法損害了體育運(yùn)動(dòng)的本來(lái)目的,也違反了奧林匹克公平競(jìng)賽的原則。同時(shí),因藥物的毒副作用嚴(yán)重地威脅著運(yùn)動(dòng)員的身體健康,國(guó)際奧委會(huì)(IOC)明文規(guī)定禁止運(yùn)動(dòng)員服用某些藥物,并自1968年起在比賽中對(duì)運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行“濫用藥物”的檢測(cè),若查出他已服用,便立即取消其參賽資格及所得名次。由于最早服用的藥物多為興奮性藥物——刺激劑類,所以盡管以后也禁用了其他類型的藥物,但在我國(guó)則常常將所有的禁用藥物統(tǒng)稱為“興奮劑”,有關(guān)的檢測(cè)工作則統(tǒng)稱為“”。正確的叫法應(yīng)為“濫用藥物”及“濫用藥物檢測(cè)”,分別對(duì)應(yīng)于英文“doping”和“doping control”。為方便起見,本文仍使用“興奮劑”一詞,即包括所有的禁用的濫用藥物。  

一 服用藥物歷史

在競(jìng)賽中服用各種物質(zhì)以求獲得優(yōu)勢(shì)的做法已有多年歷史。早在公元前600年,古羅馬的斗士就使用過刺激劑。公元前3世紀(jì),希臘人也曾服用過蘑菇以求提高成績(jī)。19世紀(jì)80年代在法國(guó)的自行車600km比賽中發(fā)生過運(yùn)動(dòng)員因服用藥物而死亡。1910年已開始對(duì)參賽馬匹的唾液進(jìn)行藥物檢查。在1960年,羅馬上發(fā)生了丹麥自行車運(yùn)動(dòng)員Kurt EnemarKnud Jensen因服用苯丙胺類而死亡的事件。在1967年,環(huán)法自行車賽中英國(guó)的運(yùn)動(dòng)員Tommy Simpson也因服用苯丙胺藥物而喪生。這些事件促使了國(guó)際奧委會(huì)醫(yī)學(xué)委員會(huì)對(duì)1968年第19屆開始實(shí)行藥物檢查。當(dāng)時(shí)禁用的藥物只有8種,檢測(cè)方法是氣相色譜(氫焰離子化檢測(cè)器)法和薄層色譜法等。1972年第20屆奧運(yùn)會(huì)時(shí),禁用藥物增加至26種,檢測(cè)儀器采用氣相色譜-氮磷檢測(cè)器。1976年,又增加了甾體同化激素一類5種禁用藥物,使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器。1980年公布的禁用藥物為58種,開始采用毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè)。其后1984年增至69種。1988年再增加β-阻斷劑和利尿劑類藥物,總數(shù)達(dá)100種。1991年增加一類多肽,1994年12月IOC公布的禁用藥物共分為七類,計(jì)108種。有關(guān)歷屆奧運(yùn)會(huì)檢測(cè)運(yùn)動(dòng)員數(shù)目及陽(yáng)性結(jié)果列于表1。

表1  歷屆奧運(yùn)會(huì)的藥物檢測(cè)結(jié)果


*其中1金牌,1銀牌,2銅牌子  **其中3金牌,1銅牌

二 禁用藥物

1995年禁用的藥物,按其性質(zhì)可分為7類(見表2),分述如下:

表2禁用藥品名單(1994,12)

注意:該表并非禁用物質(zhì)的詳盡無(wú)遺的一覽表。僅向讀者提供一個(gè)較為綜合的禁用物質(zhì)一覽表,于該擴(kuò)展表中沒有出現(xiàn)的許多物質(zhì)按“及相關(guān)物質(zhì)”術(shù)語(yǔ)被認(rèn)為禁用。




 


  

1.刺激劑 這類藥物共有41種。它們通過神經(jīng)系統(tǒng)的作用,增強(qiáng)人的精神與體力。其副作用是導(dǎo)致過度興奮與焦慮,進(jìn)一步影響判斷力而容易受傷,心率及血壓會(huì)急速上升,有可能造成脫水、腦溢血及心臟病發(fā)作。上述兩例運(yùn)動(dòng)員的死亡就是服用這類藥物引起的。這類藥物中含咖啡因,奧委會(huì)規(guī)定尿中咖啡因含量超過12μg/ml才算違禁。

2.麻醉劑 這類藥物共有10種。服用后可產(chǎn)生痛快感及心理亢奮,并能降低痛感,以致在參賽中造成更嚴(yán)重的傷害。這類藥物多有成癮性,會(huì)引起很多生理及心理問題。

3.合成類固醇及β2激動(dòng)劑 這類藥物共27種。合成類固醇又稱甾體同化激素,是雄性激素衍生物。這類藥物具有增長(zhǎng)肌肉的作用,為很多運(yùn)動(dòng)員口服或注射使用,但副作用也很嚴(yán)重,會(huì)干擾人體的自然激素平衡,男人服用后會(huì)發(fā)生抑制雄性激素分泌,睪丸縮小,胸部擴(kuò)大,早禿等現(xiàn)象;女人服用后,會(huì)發(fā)生男性化,肌肉增生,月經(jīng)失調(diào),毛發(fā)增多等現(xiàn)象。有些作用還是不可逆的。過多地使用這類藥物還會(huì)引起嚴(yán)重的肝、腎損傷、并發(fā)肝癌及心臟病癥等。這類藥物中的睪酮是人體自然分泌的一種激素,所以規(guī)定要測(cè)定睪酮與其異構(gòu)體表睪酮之比值,大于6時(shí)可判斷為使用了此類藥物。另有幾種β2激動(dòng)劑,據(jù)認(rèn)為也有類似作用。

4.β-阻斷劑 這類藥物共有12種。原為降低血壓和降低心率的藥物,但同時(shí)具有鎮(zhèn)靜作用。對(duì)于射擊、射箭等項(xiàng)目的運(yùn)動(dòng)員,穩(wěn)定神經(jīng),提高成績(jī)。

5.利尿劑 共13種。這類藥物會(huì)促進(jìn)排尿,使尿液變稀,使禁用藥物在尿中的濃度減小而不易查出。還可使體重下降,因此在一些有體重限制的比賽項(xiàng)目中常有運(yùn)動(dòng)員服用。

6.遮蔽劑 共2種。表睪酮是因?yàn)槭褂煤罂墒共G酮與表睪酮的比值變小,從而遮蔽了睪酮的違禁使用。另一藥物丙磺舒則在服用后可抑制合成類固醇類藥物在尿中的排出,因而使此類藥物在尿中的濃度降低,可能不被檢出。

7.肽類激素 共4種。都是內(nèi)源性激素,使用后或可起到雄性激素作用,或可增加身體耐力,因而也被禁用。

禁用藥物除去上述這些品種外,還包括結(jié)構(gòu)和性質(zhì)與這些藥物相似的物質(zhì),所以實(shí)際禁用藥物決不限于已列出的這些,會(huì)大大超過這個(gè)數(shù)目。這些類似的藥物都做為“有關(guān)化合物”,也是禁用的,是為了防止運(yùn)動(dòng)員取巧,服用新發(fā)明的某些藥物?!?nbsp;

檢測(cè)手續(xù)

都是通過尿樣的分析來(lái)進(jìn)行的。被檢查的運(yùn)動(dòng)員一般是獲得了名次的,對(duì)未獲名次的則是隨機(jī)選擇。比賽結(jié)束后一個(gè)小時(shí)內(nèi),被選中的運(yùn)動(dòng)員需去取樣站報(bào)到,有專人伴隨左右,直至取得尿樣為止。一般需取尿樣至少75ml,分裝兩個(gè)瓶?jī)?nèi),一瓶裝約50ml,稱為A樣,另一瓶裝25ml,稱為B樣。將A樣與B樣密封、編號(hào),再裝入一個(gè)袋中,密封,冷凍保存,送往檢測(cè)中心分析。在分析時(shí),先用A樣進(jìn)行,應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)得出結(jié)果,如查出尿樣中有禁用藥物,則由檢測(cè)中心通知組織委員會(huì),再通知運(yùn)動(dòng)員及其所在體育隊(duì)隊(duì)長(zhǎng)、隊(duì)醫(yī)。大家會(huì)同當(dāng)面取出B樣再進(jìn)行分析復(fù)審,如仍檢測(cè)出有禁用藥物,則由醫(yī)學(xué)委員會(huì)討論決定采取措施。

由于服用藥物影響運(yùn)動(dòng)員的聲譽(yù),所以檢測(cè)工作要求極嚴(yán)格,并采取嚴(yán)密的保安措施,以防止各種弄虛作假的欺騙行為?!?nbsp;

四 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的資格

對(duì)檢測(cè)興奮劑的實(shí)驗(yàn)室,國(guó)際奧委會(huì)有一套規(guī)定的申請(qǐng)手續(xù)與方法,經(jīng)測(cè)試合格后,才有資格進(jìn)行這項(xiàng)工作,其所發(fā)出的分析結(jié)果報(bào)告才被認(rèn)為有效。現(xiàn)在的規(guī)定是:如欲承擔(dān)某國(guó)際性比賽的,必須在比賽前一年通過正式考試,而在參加正式考試前的半年至一年內(nèi),要先通過3次預(yù)考試。每次考試須分析10個(gè)未知尿,并在24小時(shí)內(nèi)得出正確結(jié)果。如有一個(gè)不正確,須重新補(bǔ)做2個(gè)未知樣品并得出正確結(jié)果。如只做對(duì)7個(gè)考試尿樣,則作不及格論,須過一年后再行申請(qǐng)考試。

考試合格的實(shí)驗(yàn)室的有效工作期限為一年,翌年初須進(jìn)行復(fù)核。復(fù)核時(shí)要分析8個(gè)未知尿樣,并得出正確結(jié)果,做錯(cuò)1個(gè)時(shí),可補(bǔ)加2個(gè)未知樣品。如上所述,如復(fù)核不能通過,則該實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)資格即被取消。

國(guó)際奧委會(huì)醫(yī)學(xué)委員會(huì)對(duì)申請(qǐng)興奮劑檢測(cè)資格考試的實(shí)驗(yàn)室首先要對(duì)其人員組成、業(yè)務(wù)能力、過去成就、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備、所用興奮劑檢測(cè)方法、禁用藥物標(biāo)準(zhǔn)品、禁用藥物陽(yáng)性尿、原型藥物和必要的代謝物的氣相色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)等等進(jìn)行審查,認(rèn)為合格后才同意其申請(qǐng)。較困難的是標(biāo)準(zhǔn)品的收集和陽(yáng)性尿的取得,因?yàn)榻盟幬锸鞘澜绺鞯厣a(chǎn)的、需通過多種渠道才能收集完全;有些藥物還需要特殊許可才可攜帶或運(yùn)輸郵寄。陽(yáng)性尿的取得則要有自愿服用這些藥物的人按時(shí)收集尿液,作為檢測(cè)時(shí)的對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)。除了用運(yùn)動(dòng)員的尿樣分析結(jié)果來(lái)確證其是否服用某藥物外,同時(shí)要有此藥物的標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性尿和空白尿的色譜和質(zhì)譜圖譜,共同對(duì)照比較。當(dāng)尿樣與標(biāo)準(zhǔn)品和陽(yáng)性尿的數(shù)據(jù)完全相同時(shí)才可確證?!?

五 檢測(cè)步驟

尿樣由專人送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室后,需登記、編號(hào),并測(cè)量某些基本數(shù)據(jù),如pH、比重、顏色、體積及有無(wú)沉淀等。然后將尿樣分取數(shù)份,按組進(jìn)行篩選,若篩選中查出有違禁藥物,則需進(jìn)一步確證其存在。

色譜方法是較理想的檢測(cè)手段。1967年報(bào)道的刺激劑系統(tǒng)檢測(cè)方法分為三步:第一步為篩選,第二、三步為確證。用兩種提取方法以氣相色譜法(GC)、薄層色譜法(TLC)進(jìn)行分離鑒定,使用了4種GC填充柱系統(tǒng),氫焰離子化檢測(cè)器,可檢出40種興奮劑。其后隨著色譜技術(shù)的發(fā)展及禁用藥物的增加,檢測(cè)方法也相應(yīng)地不斷改進(jìn)。1972年采用了程序升溫方法,并用氮磷檢測(cè)器檢測(cè)。1976年使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用手段檢測(cè)甾體,1980年開始用毛細(xì)管氣相色譜法檢測(cè),至1984年大體基本定型,并增加了用高效液相色譜法檢查幾種特定藥物及咖啡因定量等工作。1988年增加了2類藥物,β-阻斷劑多用氣相色譜法檢出,利尿劑則用高效液相色譜法檢測(cè)。目前一般按興奮劑類別分為4組或5組進(jìn)行。各實(shí)驗(yàn)室所用方法的原理大同小異,具體試驗(yàn)條件則根據(jù)自己的具體情況而有所不同。檢測(cè)的第一步是篩選,如未查出任何禁用藥物即做為陰性尿,不再考慮;如查出有禁用藥物存在,則仍需進(jìn)一步分析,稱為“確證”?,F(xiàn)以我們?cè)诘谑粚脕嗊\(yùn)會(huì)所用的檢測(cè)方法為例,說明如下:

1.篩選方法

尿樣送到試驗(yàn)室后,分別取數(shù)毫升放小試管內(nèi),分交各組進(jìn)行篩選實(shí)驗(yàn)。共分為:揮發(fā)性含氮化合物組、難揮發(fā)含氮化合物組、利尿劑及特殊結(jié)構(gòu)化合物組、甾體同化激素組。

(1)揮發(fā)性含氮化合物組 主要檢測(cè)刺激劑。這類藥物多以游離形式排出,其檢測(cè)流程如圖1,所用氣相色譜條件列于表3。

(2)難揮發(fā)含氮化合物組 主要檢測(cè)麻醉鎮(zhèn)痛劑和β-阻斷劑。這兩類藥物多以結(jié)合形式排出,因此需先水解,使之游離,再進(jìn)行衍生化后檢測(cè),其方法流程如圖2,色譜條件如表4所示。 

表3氣相色譜操作條件


表4 氣相色譜操作條件

 

(3)利尿劑組藥物經(jīng)提取后用高效液相色譜法分析檢測(cè),此組同時(shí)檢測(cè)2種興奮劑,咖啡因和匹莫林,檢測(cè)程序和色譜條件分別見圖3和表5。

表5  液相色譜操作條件

 

(4)甾體同化激素組 此類藥物有的以游離形式,有的以結(jié)合形式排出,我們所用的方法為同時(shí)檢測(cè)。其流程和色譜條件如圖4和表6所示。

表6 氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件


2.確證方法

經(jīng)篩選判為陽(yáng)性的尿樣,需進(jìn)一步加以確證,根據(jù)規(guī)定,確證結(jié)果須給出藥物或其代謝物的質(zhì)譜圖,因此在確證方法中均使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,確證時(shí)的分組同篩選方法中所述。

(1)揮發(fā)性含氮化合物組方法同篩選,最后之提取物濃縮后進(jìn)樣于GC/MSD。色譜條件見表7。

表7  氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件

  

(2)難揮發(fā)含氮化合物組方法同篩選,最后之衍生化產(chǎn)物取小量進(jìn)樣于GC/MSD。色譜條件見表8。

表8  氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件
 
 

(3)利尿劑組此組藥物需衍生化,然后進(jìn)樣于GC/MSD。方法見圖5(a,b)色譜條件見表9。

表9氣-質(zhì)聯(lián)用操作條件
 
 

(4)甾體同化激素組 方法均同篩選,唯最后得出全質(zhì)譜圖作為確證。

現(xiàn)代的興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室多采用自動(dòng)化程度較高的儀器,并由計(jì)算機(jī)控制,可以自動(dòng)進(jìn)樣,提高準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性,并可編制檢測(cè)程序,大大方便了此項(xiàng)工作。

需要提出的是禁用藥物中的肽類激素藥物是1990年以后才提出的,目前還沒有很好的檢測(cè)方法,同時(shí)因?yàn)樗鼈兌际侨梭w內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì),在分析方法和數(shù)據(jù)積累、限量等方面還需要做更多的工作才能訂出較合適的標(biāo)準(zhǔn)?!?nbsp;

六  我國(guó)的興奮劑檢測(cè)工作

為迎接1990年第十一屆亞運(yùn)會(huì)在北京召開和承擔(dān)運(yùn)動(dòng)員尿樣的檢測(cè)工作,于1986年9月由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所和國(guó)家體委體育科學(xué)研究所協(xié)作,共同籌建我國(guó)的興奮劑檢測(cè)中心。經(jīng)過三年的努力,1989年3月開始,接受了IOC醫(yī)學(xué)委員會(huì)興奮劑和體育生化分委會(huì)的三次預(yù)考和兩次水平考試,共38個(gè)未知尿樣均獲得了準(zhǔn)確結(jié)果,順利通過。于1989年11月正式考試,分析10個(gè)未知尿樣,又按時(shí)得出全部正確結(jié)果,同年12月8日,IOC副主席、IOC醫(yī)學(xué)委員會(huì)主席Alexandre de Merode親王寫信給中國(guó)興奮劑檢測(cè)中心,正式通知確認(rèn)其為合格的興奮劑檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。因此我國(guó)成為當(dāng)時(shí)世界上第20個(gè)、亞洲第3個(gè)合格的實(shí)驗(yàn)室,可以獨(dú)立承擔(dān)各種運(yùn)動(dòng)比賽的興奮劑檢測(cè)工作。此后每年復(fù)試也都合格,一直保持了此資格?,F(xiàn)在該檢測(cè)中心設(shè)在國(guó)家體委運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)研究所內(nèi)。 

 



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