為什么雙光子成像如此重要？

　　成像技術(shù)一直是推動聲明科學(xué)進(jìn)步的主要動力。歷史上，X射線、全息照相法、MRI核共振成像、超高分辨率顯微成像技術(shù)都獲得了Nobel獎。

　　進(jìn)入新千年，腦科學(xué)研究成為熱點(diǎn)。工欲善其事，必先利其器。若要更好的探索人類大腦，就必須有更好的儀器與工具。目前，各國腦科學(xué)計(jì)劃的一個核心方向就是打造用于全景式解析腦連接圖譜和功能動態(tài)圖譜的研究工具。 其中，如何打破尺度壁壘，整合微觀神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動與大腦整體的活動和個體行為信息，是領(lǐng)域內(nèi)亟待解決的一個關(guān)鍵挑戰(zhàn)。

　　近日，自然雜志子刊 Nature Methods 發(fā)布了來自于中國在這方面的研究進(jìn)展。該論文主要展示了《超高時空分辨微型化雙光子在體顯微成像系統(tǒng)》的研究成果——新一代高速高分辨微型化雙光子熒光顯微鏡成功研制，并獲取了小鼠在自由行為過程中大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動清晰、穩(wěn)定的圖像。

　　該研究成果源自于國家自然科學(xué)基金委員會計(jì)劃局組織的國家重大科研儀器設(shè)備研制專項(xiàng)，當(dāng)時共有9個項(xiàng)目入選。北京大學(xué)程和平院士主導(dǎo)的《超高時空分辨微型化雙光子在體顯微成像系統(tǒng)》就是其中之一，當(dāng)時也獲得了7200萬元的經(jīng)費(fèi)支持。

　　過去三年，北京大學(xué)分子醫(yī)學(xué)研究所、信息科學(xué)技術(shù)學(xué)院、動態(tài)成像中心、生命科學(xué)學(xué)院、工學(xué)院，聯(lián)合中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院組成跨學(xué)科團(tuán)隊(duì)，完成了的這一研發(fā)工作。團(tuán)對成功研制新一代高速高分辨微型化雙光子熒光顯微鏡，并獲取了小鼠在自由行為過程中大腦神經(jīng)元和神經(jīng)突觸活動清晰、穩(wěn)定的圖像。研究論文2016年12月提交，2017年5月29日正式在自然雜志子刊 Nature Methods 發(fā)布。

　　根據(jù)官方提供的信息，產(chǎn)品相比單光子激發(fā)，雙光子激發(fā)具有良好的光學(xué)斷層、更深的生物組織穿透等優(yōu)勢，其橫向分辨率達(dá)到 0.65μm，成像質(zhì)量可達(dá)商品化大型臺式雙光子熒光顯微鏡水平，并優(yōu)于美國所研發(fā)的微型化寬場顯微鏡。該顯微鏡采用雙軸對稱高速微機(jī)電系統(tǒng)轉(zhuǎn)鏡掃描技術(shù)，成像幀頻已達(dá)40Hz(256*256像素)，同時具備多區(qū)域隨機(jī)掃描和每秒 1 萬線的線掃描能力。

　　此外，采用自主設(shè)計(jì)可傳導(dǎo) 920nm 飛秒激光的光子晶體光纖，該系統(tǒng)首次實(shí)現(xiàn)了微型雙光子顯微鏡對腦科學(xué)領(lǐng)域最廣泛應(yīng)用的指示神經(jīng)元活動的熒光探針(如 GCaMP6)的有效利用。

　　同時采用柔性光纖束進(jìn)行熒光信號的接收，解決了動物的活動和行為由于熒光傳輸光纜拖拽而受到干擾的難題。未來，與光遺傳學(xué)技術(shù)的結(jié)合，望在結(jié)構(gòu)與功能成像的同時，精準(zhǔn)地操控神經(jīng)元和神經(jīng)回路的活動。

　　值得一提的是，該顯微鏡重僅 2.2 克，可在小動物頭部顱窗上，實(shí)時記錄數(shù)十個神經(jīng)元、上千個神經(jīng)突觸的動態(tài)信號;在大型動物上，還有望實(shí)現(xiàn)多探頭佩戴、多顱窗不同腦區(qū)的長時程觀測。

　　之所以說這一研究成果意義重大，主要是因?yàn)樗鼮槟X科學(xué)、人工智能學(xué)科的研究提供了重要的高端儀器。具體來說，微型雙光子熒光顯微成像技術(shù)改變了在自由活動動物中觀察細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的方式，可用于在動物覓食、哺乳、跳臺、打斗、嬉戲、睡眠等自然行為條件下,或者在學(xué)習(xí)前、學(xué)習(xí)中和學(xué)習(xí)后，長時程觀察神經(jīng)突觸、神經(jīng)元、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、遠(yuǎn)程連接的腦區(qū)等多尺度、多層次動態(tài)變化。

　　(注：本圖形象的表述了這一研發(fā)成果的意義)

　　事實(shí)上，成像技術(shù)一直是推動生命科學(xué)進(jìn)步的主要動力。歷史上，X射線、全息照相法、CT計(jì)算機(jī)斷層成像、電子顯微鏡、MRI核共振成像、超高分辨率顯微成像技術(shù)都推動了科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，也都獲得了Nobel獎。

　　在今天的發(fā)布會之前，該成果在 2016 年底美國神經(jīng)科學(xué)年會、2017 年 5 月冷泉港亞洲腦科學(xué)專題會議上報(bào)告后,得到包括多位諾貝爾獎獲得者在內(nèi)的國內(nèi)外神經(jīng)科學(xué)家的認(rèn)可。冷泉港亞洲腦科學(xué)專題會議主席、美國著名神經(jīng)科學(xué)家加州大學(xué)洛杉磯分校的 Alcino J Silva 教授認(rèn)為，“ 這款顯微鏡將改變我們在自由活動動物中觀察細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的方式……系統(tǒng)神經(jīng)生物學(xué)正在進(jìn)入一個新的時代，即通過對細(xì)胞群體中可辨識的細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)雜生物學(xué)事件進(jìn)行成像觀測，從而更加深刻地理解進(jìn)化所造就的大腦環(huán)路實(shí)現(xiàn)復(fù)雜行為的核心工程學(xué)原理。”

　　這項(xiàng)技術(shù)研發(fā)成功的同時，團(tuán)隊(duì)也成立了一家叫做“超維景”的公司，并獲得了來自協(xié)同創(chuàng)新基金、中科創(chuàng)星(西科天使)的融資，公司將會在符合北大政策的前提下，由北大支持進(jìn)行商業(yè)化推廣。團(tuán)隊(duì)接下來的重心仍是技術(shù)迭代、新產(chǎn)品研發(fā)。